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假單胞菌屬及其檢驗方法!

 一、介紹

 
椰毒假單胞菌酵米面亞種(Psedomonas cocovenenans supsp.farino fermentans)是我國發現的一種新的食物中毒菌,它存在于發酵的玉米、糯玉米、黃米、高梁米、變質銀耳以及周圍環境中,它是酵米面及變質銀耳中毒的病原菌。該菌產生的毒素米酵菌酸是其致病原因。
 
該食物中毒的主要癥狀,開始患者感到上腹部不適,少數出現腹瀉、惡心、嘔吐,嘔吐物多為咖啡色,嚴重者出現黃疸?;杳?、四肢抽搐、少尿、血尿、便血和尿潴留,呈現休克而死亡。目前尚無特效的治療辦法。
 
該菌為革蘭氏陰性桿菌,長2.5-3μm,寬0.5-1.0μm,呈桿狀、球桿狀或稍彎曲,兩端鈍圓,無芽胞,有鞭毛。
 
本菌為兼性厭氧,但易在表面生長。最適生長溫度為37,最適產毒溫度為26。pH5-7范圍內生長較好。
 
本菌抵抗力較弱,565分鐘即可殺死,對各種常用消毒劑抵抗力也不強。
 
二、檢驗方法
 
樣品先在GVC增菌液中進行增菌,然后劃線接種于PDA平板,挑選可疑菌落進行革蘭氏染色觀察及氧化酶試驗。如為革蘭氏陰性小桿菌,氧化酶試驗陰性,再接種于卵黃瓊脂平板和SS平板。
 
從卵黃瓊脂平板上挑取卵磷脂酶陽性、并帶有彩虹環的單個菌落,接種于馬鈴薯-葡萄糖瓊脂斜面,獲得純培養物。
 
將純培養物分別接種于 Hugh-Leifson培養基,蛋白胨水,緩沖蛋白胨水,西蒙氏檸檬酸鹽培養基,糖發酵管及苯丙酸培養基,進行生化反應試驗。
 
同時利用純培養物進行血清分型鑒定。
 
初步鑒定為椰毒假單胞菌酵米面亞種的菌株,進行產毒培養和小鼠毒力試驗,同時進行米酵菌酸的測定。
 
三、說明
 
1、分離培養
 
該菌在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂平板上菌落為1~2mm灰白色或乳黃色,光滑、濕潤,邊緣整齊,培養48h后,中心有凸起,呈草帽狀,菌落周圍產生黃綠色色素,擴散到基質中。
 
在卵黃瓊脂平板上,菌落表面光滑,濕潤,48h后,菌落周圍形成乳白色混濁環,在斜射日光下,可見環的周圍呈現虹彩現象。
 
該菌在SS瓊脂平板上不生長。
 
2、O/F試驗
 
將該菌培養在Hugh-leifson培養基,方法是挑取少量培養物做穿刺接種,同時接種兩支培養基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂1~2mL于表面,放30培養。該菌為氧化型。封口培養不產酸,開口培養產酸。
 
3、本菌與假單胞菌的鑒別
 
椰毒假單胞菌酵米亞種與椰毒假單胞菌各種培養性狀,生物第學性狀基本一致,只在側金盞花醇的利用上有區別。椰毒假單胞菌酵米亞種側金盞花醇為陽性。
 
4、米酵菌酸的判定
 
從中毒樣品中提取米酵菌酸,包括發酵食品或變質銀耳,或分離出的椰毒假單胞菌酵米面亞種中提取的米酵菌酸,其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg(食品)才有意義。